细胞培养服务具体步骤及要求如下

　　细胞培养是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养服务是伊莱博生物的基础服务项目之一。

　　细胞培养服务也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个*的过程，细胞培养本身就是细胞的大规?？寺?。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术*的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中核心、基础的技术。

　　细胞培养服务的细胞培养具体步骤和要求以及注意事项：

　　一、复苏

　　1、把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

　　3、把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4、标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5、3天换一次培养基。

　　二、传代

　　1、培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2、把原有培养基吸掉。

　　3、加适当的胰蛋b酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。

　　4、细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5、用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6、把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7、倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8、根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、冻存

　　把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。

　　冻存液的配制：70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。