免疫荧光实验的流程具体如下

　　免疫荧光实验是一种基于免疫学、生物化学和显微镜技术的强大方法，主要原理是利用荧光标记的抗体作为探针，定位和定性分析组织或细胞内特定抗原。实验中，先用已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体或抗原作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原或抗体。荧光素受到激光的激发照射会发出明亮的荧光（红色或绿色），据此可以观察到荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，并利用定量技术测定其含量。

　　免疫荧光实验流程如下：

　　1、样品准备：

　　对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。

　　2、固定：

　　根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5 min。

　　3、通透：

　　使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min。通透后用PBS洗涤3×5 min。

　　4、封闭：

　　使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min。

　　5、一抗结合：

　　室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次，每次冲洗5min。

　　6、二抗结合：

　　间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h。PBST漂洗3次，每次冲洗5min后，再用蒸馏水漂洗一次。

　　7、封片及检测：

　　滴加封片剂一滴，封片，荧光显微镜检查。